Иммуномодулирующее действие препарата оценивали в следующих тестах:
1. Определение влияния препарата на число антителообразующих клеток (АОК) в селезенках мышей, иммунизированных эритроцитами барана (ЭБ).
В первом варианте эксперимента высушенный концентрат испытуемого вещества разводили физиологическим раствором и вводили подкожно неинбредным мышам массой 16-18 граммов в дозах 1 мкг и 100 мкг за сутки до иммунизации эритроцитами барана (2х108 внутрибрюшинно). Мышам контрольной группы вводили 100 мкл физиологического раствора.
Во втором варианте эксперимента неинбредных мышей массой 16-18 граммов ежедневно поили раствором «Стимеллиса» (концентрация 75 мкг/мышь) в течение 4 дней до иммунизации ЭБ (2х108 внутрибрюшинно).
Результаты этой серии экспериментов представлены в таблице 1.
Таблица 1
Группа Дозы |
Количество АОК на селезенку |
Индекс стимуляции |
|
Подкожное введение |
1 мкг |
2 75 ± 14,0 |
+2,1 |
концентрата |
100 мкг |
198,0 =ь 73,7 |
+1,5 |
Контроль |
- |
128,0 ± 55,0 |
|
Пероральное введение «Стимеллиса |
75 мкг |
419,0 ± 33,1 |
+1.4 |
Контроль |
- |
298,0 ± 30,4 |
|
2. Определение влияния препарата на клеточность селезенки и число иммунных розеткообразующих клеток (РОК) мышей, иммунизированных ЭБ.
Неинбредных мышей массой 16-18 граммов ежедневно в течение 4 дней до иммунизации ЭБ (2х108 ) поили раствором «Стимеллиса» (концентрация 75мкг/мышь). На 4 сутки после иммунизации определяли клеточность селезенки и количество иммунных РОК.
Результаты
Относительная клеточность селезенки ( спленоциты (млн) / масса селезенки (мг) ) и количество иммунных РОК при пероральном введении «Стимеллиса» неинбредным мышам не изменяются: индекс клеточности в контрольной группе 0,08, в опытной - 0,08; РОК : опыт - 46,4±7,8%, контроль - 47,0±6,3%.
3. Влияние «Стимеллиса» на фагоцитоз Y.pseudotuberculosis в нейтрофилах перитонеального экссудата мышей (опыты in vivo).
Неинбредных мышей массой 16-18 граммов ежедневно в течение 8 дней поили раствором «Стимеллиса» (75 мкг/мышь ежедневно).
Мышей заражали внутрибрюшинно Y.pseudotuberculosis (шт. 2348(Iв) в дозе 500 млн. микр. тел. Через 1,3,5,7,18 часов мышей вскрывали, готовили мазки экссудата, фиксировали, окрашивали и микроскопировали.
Результаты
У мышей опытной группы, получивших «Стимеллис», уже через 3 часа отмечается усиленная (по сравнению с контролем) миграция в брюшную полость полиморфноядерных лейкоцитов, усиление поглотительной и переваривающей активности фагоцитов. Через 5 часов фагоцитоз в нейтрофилах опытных мышей. завершен, брюшная полость очищена от микроорганизмов. В контроле в этот срок отмечено размножение микроорганизмов.
Таблица 2
Влияние «Стимеллиса» на фагоцитарную активность нейтрофилов (НФ) перитонеальной полости мышей
|
Контроль (физ. раствор) |
Опыт («Стимеллис») |
||||
|
%НФ среди клеток экссудата |
ФП% |
ФЧ |
%НФ среди клеток экссудата |
ФП% |
ф4 |
1час |
16,0 ± 3,2 |
50,0 ± 14,1 |
2,0 ± 0,3 |
18,0 ± 4,3 |
58,0 ± 13,6 |
2,3 ± 0.7 |
Зчаса |
43,6 ± 11,7 |
46,3 ±10,5 |
1,6 ± 0,7 |
92,0 ± 21,1 |
62,5 ± 7,9 |
3,4 ± 0,3 |
5 часов |
70,0 ± 12,4 |
32,0 ± 9,8 |
0,5 ± 0,1 |
98,0 ± 21,6 |
В НФ следы переваренных микроорганизмов |